简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程js金沙，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

　　去污剂的主要作用是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中一般会加入蛋白酶，利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂（如 GIT、 GuHCl 等）裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是基因组 DNA 抽提的主流。盐的主要作用除了提供一个合适的裂解环境（如Tris），还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏（如 EDTA）、维持核酸结构的稳定（如 NaCl）等。

　　Tips：细胞的生物膜系统指细胞膜、细胞器膜、核膜。无膜的有核糖体、中心体；单膜的有细胞膜、内质网膜、高尔基体膜、液泡膜及溶酶体膜；双膜的有核膜、线粒体膜（及叶绿体膜）。

　　最常用的纯化方法，一是 PC 抽提+ 醇沉淀，二是介质纯化。第一种方法是利用 PC 对裂解体系进行反复抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分离；再用醇将核酸沉淀下来，实现核酸与盐的分离。第二种方法则是利用某些固项介质（磁珠纯化），在某些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。

　　一般采血做基因检测都会告知用EDTA抗凝真空采血管进行采血，那么为什么要用EDTA的采血管（或枸橼酸钠抗凝采血管）？而不建议用其他的采血管（比如肝素抗凝采血管）？

　　做基因检测一般建议不要采用肝素作抗凝剂，因为肝素不仅会影响裂解液对血细胞的裂解从而影响DNA的提取，还是一些酶（比如Taq酶）的活性抑制剂，因此在使用经肝素处理的血样直接进行PCR扩增时，会抑制Taq酶的活性，进而就会影响扩增效果（PCR反应无法进行）。

　　Tips：肝素酶 I 具有降解肝素的作用，如果在PCR反应体系中加入肝素酶 I，或许可以促进PCR反应的顺利进行。一般肝素的用量为在50ml的PCR的反应体系中加1ml（0.5U/ml）的肝素酶

　　EDTA（乙二胺四乙酸）采血管， 一般有EDTA 二钠、二钾和三钾盐几种类型。它们均可与镁离子（Mg2＋）、钙离子（Ca2＋）结合成螯合物阻止血液凝固，同时还可以抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）对DNA的降解作用，因为DNase作用时需要一定的金属离子作为辅基。同时，EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶（具有溶菌的作用）的反应要求有较低的离子强度的环境。

　　一般提取质粒不会用到蛋白酶K，而如果是提取基因组，那么一般要用到蛋白酶K。

　　蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。

　　蛋白酶K的作用是使膜蛋白降解，使与DNA结合的蛋白质降解，使DNA充分游离。通常是在有机溶剂抽提之前先用某些蛋白水解酶去掉大部分蛋白质，这些广谱的蛋白水解酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶 K。

　　加RNA酶的目的其实就是最大限度的获得纯的DNA，所以其实不加也是可以的。

　　但是如果抽提DNA的过程中加入RNase，为了纯化DNA，那么必须将多余的RNse去除掉，因为RNase本身是一种蛋白质。这时候可以加SDS与KAc（或NaAc）来处理，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。

　　Tips：SDS，十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS），是分离 DNA 时常用的一种阴离子除垢剂，常用于 DNA 提取过程中使蛋白质变性后与 DNA 分开，溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；对 RNase、 Dnase 有一定的抑制作用；SDS能够与蛋白质结合形成R1-O-SO3-…R2+-蛋白质复合物， 使蛋白质变性沉淀。

　　用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

　　DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。

　　在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？

　　在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。